Surgimento de Mycobacterium orygis

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A tuberculose causada por Mycobacterium orygis foi detectada em 2 cervos malhados de um santuário de vida selvagem no oeste da Índia e em um bisão indiano de um parque nacional no centro da Índia. A vigilância nacional é urgentemente necessária para esclarecer a epidemiologia do complexo Mycobacterium tuberculosis na interface homem-gado-vida selvagem.

A tuberculose (TB) causada por Mycobacterium orygis foi relatada em humanos, bovinos e, raramente, em animais selvagens na Índia (1–3). Relatamos 3 casos de TB associada a M. orygis em animais selvagens entre 85 mortes inexplicadas rastreadas como parte das investigações da doença durante fevereiro de 2016 a março de 2020, que também revelaram casos de broncopneumonia supurativa (n = 32), TB causada por M. tuberculosis ou M. bovis (n = 29), pneumonia verminosa (n = 9), granulomas fúngicos (n = 6) e neoplasias (n = 6).

Em fevereiro de 2016, dois veados adultos criados ao ar livre (um macho [caso 1] e uma fêmea [caso 2]) foram encontrados mortos no Girnar Wildlife Sanctuary, Gujarat, oeste da Índia. O exame pós-morte revelou nódulos amarelo-pálidos não uniformes, multifocais e coalescentes embutidos no parênquima dos pulmões com material branco-amarelado caseado e fígado aumentado e linfonodos mesentéricos com nódulos superficiais. Em janeiro de 2017, um bisão macho adulto emaciado (caso 3) foi encontrado morto no Parque Nacional de Bandhavgarh, Madhya Pradesh, centro da Índia. Semelhante ao cervo, o bisão tinha nódulos caseosos brancos de tamanho variável na pleura visceral, parênquima pulmonar superficial e linfonodos pulmonares.

Para investigar o agente causador, tecidos dos pulmões, fígado e linfonodos foram coletados em gelo e formalina tamponada neutra a 10% e processados ​​para histopatologia, coloração de Ziehl-Neelsen e isolamento da cultura. O exame histopatológico desses tecidos revelou grandes granulomas com extensa necrose caseosa e múltiplas áreas calcificadas circundadas por células epitelioides, linfócitos, células gigantes e fibroblastos (mais abundantes no caso 3). Os bacilos álcool-ácido resistentes foram abundantes (50-75/campo de imersão em óleo), tanto extracelularmente quanto dentro dos macrófagos. Cultivamos todas as amostras em triplicata em meio Löwenstein-Jensen com glicerol e em Löwenstein-Jensen com piruvato de sódio, que revelou colônias úmidas, lisas e granulares (4). A triagem primária de isolados bacterianos por PCR multiplex de tubo único que tem como alvo o 16S rRNA, específico para o gênero Mycobacterium, e os genes MPB70, específicos para membros do MTBC, confirmou que os isolados eram MTBC (5). Realizamos mais PCR nas amostras MTBC-positivas para determinar a presença ou ausência de regiões genômicas de diferença (RD4 e RD9) usando primers publicados (6); este teste indicou a ausência de RD9 e a presença de RD4, excluindo assim a possibilidade de M. tuberculosis, M. canetti, M. bovis ou M. bovis BCG em todos os 3 casos.

Para determinar as espécies exatas de MTBC envolvidas e suas semelhanças genéticas com cepas que afetam o gado e os seres humanos que circulam na Índia, realizamos o sequenciamento de todo o genoma pareado na plataforma Illumina MiSeq (https://www.illumina.com). A presença de marcadores genéticos padrão para M. orygis (RD1, RD4 e Rv044c) e a ausência de RD9 e RD12 confirmaram nossas sequências como M. orygis. Submetemos os dados de todo o genoma gerados ao banco de dados National Center for Biotechnology Information Sequence Read Archive sob os números de acesso. SRX15482219 (caso 1), SRX6969199 (caso 2) e SRX6969201 (caso 3).

Figura

Figura. Filogenia de Mycobacterium orygis recém-sequenciados isolados de animais selvagens de 3 animais selvagens na Índia (estrela negra, bisão; estrelas azuis, veado) e sequências de referência. O círculo externo mostra a distribuição de...

Comparamos filogeneticamente as sequências geradas neste estudo com outras sequências disponíveis de M. orygis. Os padrões de ramificação filogenética sugerem que o isolado do cervo malhado do caso 1 estava geneticamente mais próximo do isolado recuperado do bisão (caso 3) do que o isolado do cervo do caso 2 (Figura). A diferença média entre pares em todos os isolados neste estudo foi de 272; foi de 73 entre os isolados. A diversidade restrita observada entre vários dos isolados recém-descritos, incluindo aqueles recuperados entre animais silvestres de vida livre, é notável e requer investigações futuras.